产品货号：
HR0408
中文名称：
细胞周期检测试剂盒
英文名称：
产品规格：
20T|50T|100T
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1～3天
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细胞周期(cell cycle)是指细胞从前一次分裂结束起到下一次分裂结束为止的活动过程，通常由G0/G1 期、S 期、G2 期和M 期组成。G1 期：细胞开始RNA和蛋白质的合成，但DNA含量仍保持二倍体。S 期：DNA 开始合成，这时细胞核内DNA的含量介于G1 期和G2 期之间。当DNA 复制结束成为4倍体时，细胞进入G2 期。G2 期的细胞继续合成RNA及蛋白质，直到进入M 期。因此，单纯从DNA含量无法区分G2 期和M 期。一旦有丝分裂发生，细胞分裂成两个细胞，这两个细胞或者进入下一个细胞周期，或者进入静止期(G0期)，而G0 期从DNA含量上同样无法与G1 期区分。因此，整个复制周期可以描述为G0/G1、S、G2/M 期。通过核酸染料PI标记DNA,并由流式细胞仪进行分析，可以得到细胞各个时期的分布状态，计算出G0/G1%、S%、G2/M%，了解增殖能力，在肿瘤病理学研究中，通常以S 期细胞比率作为判断肿瘤增殖状态的指标。
PI 为插入性核酸荧光染料，能选择性的嵌入核酸DNA和RNA 双链螺旋的碱基之间与之结合，其结合的量与DNA的含量成正比例关系，用流式细胞仪进行分析，就可以得到细胞周期各个阶段的DNA分布状态，从而计算出各个期的百分含量。PI染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M 期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA 复制的S 期细胞的荧光强度为1-2 之间。
细胞周期检测试剂盒是利用细胞内DNA 能够和荧光染料结合的特性，细胞各个时期其DNA含量不同从而结合的荧光染料不同，流式细胞仪检测的荧光强度也不一样来检测细胞周期。
储存条件：-20℃避光保存。
有效期：一年。
注意事项：
1．细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
2．固定时在振荡器上轻轻振荡细胞，并缓慢滴加75%乙醇，直接加入会导致细胞团聚的现象，很难重悬成单细胞。或者先用冷PBS 悬浮细胞，充分悬浮，使细胞充分分散成单细胞。之后缓慢加入无水乙醇，终浓度为70-75%乙醇。乙醇固定之后须无细胞沉淀。
3．为防止不同批次细胞在实验时本身所出周期不同导致重复性差，可以在实验前进行细胞的同步化处理，减少批间差异。实验细胞应处于对数生长期，不能是完全长满，一般在50～80%比较好。
4．分析的时候需要的是单个的细胞，400 目筛网过滤是用来将粘在一起的细胞团滤掉，否则会出现人为的多倍体干扰，不过如果经验丰富的操作人员也可以gate掉。如果没有条件过滤，请在染色之前将细胞弹的很散，再进行染色。
5．组织处理方法：用剪刀将组织剪成小块，用 0.25%胰酶消化30min－1h，200－400目筛网过滤细胞，获得单细胞悬液。如组织难以消化，可加入适量胶原酶。
试剂盒以外自备试剂和仪器：
● PBS ● 纯水● 移液器及吸头 ● 流式细胞仪
使用方法：
使用注意事项：
● 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
● 最好使用含EDTA的细胞消化液。
● 洗涤细胞离心转速不可超过800g。
● 乙醇固定时离心大概采用2000g力5分钟，离心力太小可能部分细胞难以沉淀。
1．收集样本细胞，细胞数量在1-5×106个。
2．用冷PBS 洗涤细胞两次。
【注】：800g左右，离心5分钟，小心吸取上清，避免吸走细胞。
3．70%-75%冰冻乙醇-20℃固定1小时或4℃固定过夜。
【注】：轻轻吹打混匀，避免细胞成团；不能太剧烈，防止细胞损伤成碎片。
到此步可以存放，-20℃保存样品，1周内样品检测不受影响。
4．用冷PBS 洗涤细胞一次。
5．用200-500μl冷PBS重悬细胞。
6．加入Rnase A溶液20μl 37℃水浴30分钟。
7．400 目筛网过滤。
【注】：无细胞筛网可以不做此步骤。
8．加入400μl PI染液，轻轻混匀后4℃避光孵育30分钟-1小时。
【注】：染色完成后宜在24h内完成流式检测。
9．流式检测结果。激发波长为488nm。采用适当分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析。
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PI 为插入性核酸荧光染料，能选择性的嵌入核酸DNA和RNA 双链螺旋的碱基之间与之结合，其结合的量与DNA的含量成正比例关系，用流式细胞仪进行分析，就可以得到细胞周期各个阶段的DNA分布状态，从而计算出各个期的百分含量。PI染色后，假设G0/G1期细胞的荧光强度为1，那么含有双份基因组DNA的G2/M 期细胞的荧光强度的理论值为2，正在进行DNA 复制的S 期细胞的荧光强度为1-2 之间。
细胞周期检测试剂盒是利用细胞内DNA 能够和荧光染料结合的特性，细胞各个时期其DNA含量不同从而结合的荧光染料不同，流式细胞仪检测的荧光强度也不一样来检测细胞周期。
储存条件：-20℃避光保存。
有效期：一年。
注意事项：
1．细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
2．固定时在振荡器上轻轻振荡细胞，并缓慢滴加75%乙醇，直接加入会导致细胞团聚的现象，很难重悬成单细胞。或者先用冷PBS 悬浮细胞，充分悬浮，使细胞充分分散成单细胞。之后缓慢加入无水乙醇，终浓度为70-75%乙醇。乙醇固定之后须无细胞沉淀。
3．为防止不同批次细胞在实验时本身所出周期不同导致重复性差，可以在实验前进行细胞的同步化处理，减少批间差异。实验细胞应处于对数生长期，不能是完全长满，一般在50～80%比较好。
4．分析的时候需要的是单个的细胞，400 目筛网过滤是用来将粘在一起的细胞团滤掉，否则会出现人为的多倍体干扰，不过如果经验丰富的操作人员也可以gate掉。如果没有条件过滤，请在染色之前将细胞弹的很散，再进行染色。
5．组织处理方法：用剪刀将组织剪成小块，用 0.25%胰酶消化30min－1h，200－400目筛网过滤细胞，获得单细胞悬液。如组织难以消化，可加入适量胶原酶。
试剂盒以外自备试剂和仪器：
● PBS ● 纯水● 移液器及吸头 ● 流式细胞仪
使用方法：
使用注意事项：
● 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
● 最好使用含EDTA的细胞消化液。
● 洗涤细胞离心转速不可超过800g。
● 乙醇固定时离心大概采用2000g力5分钟，离心力太小可能部分细胞难以沉淀。
1．收集样本细胞，细胞数量在1-5×106个。
2．用冷PBS 洗涤细胞两次。
【注】：800g左右，离心5分钟，小心吸取上清，避免吸走细胞。
3．70%-75%冰冻乙醇-20℃固定1小时或4℃固定过夜。
【注】：轻轻吹打混匀，避免细胞成团；不能太剧烈，防止细胞损伤成碎片。
到此步可以存放，-20℃保存样品，1周内样品检测不受影响。
4．用冷PBS 洗涤细胞一次。
5．用200-500μl冷PBS重悬细胞。
6．加入Rnase A溶液20μl 37℃水浴30分钟。
7．400 目筛网过滤。
【注】：无细胞筛网可以不做此步骤。
8．加入400μl PI染液，轻轻混匀后4℃避光孵育30分钟-1小时。
【注】：染色完成后宜在24h内完成流式检测。
9．流式检测结果。激发波长为488nm。采用适当分析软件进行细胞DNA含量分析和光散射分析。
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